產(chǎn)品名稱：嗜肺軍團菌核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）
英文名稱：PCR Detection Kit for Legionella pneumophila (Fluorescent Probe Assay)

產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格：

產(chǎn)品簡介：本試劑盒適用于飲用水、非飲用水、公共場所環(huán)境樣本中嗜肺軍團菌的檢測。

檢測原理：基于Real Time PCR技術，針對嗜肺軍團菌特異性基因mip設計引物和熒光探針并優(yōu)化反應所需試劑組分，加入待檢樣品核酸即可進行擴增反應。在擴增過程中，熒光探針與目的基因片段結合，可被Taq酶分解并產(chǎn)生熒光信號，此時熒光定量PCR儀可識別該熒光信號，同時根據(jù)其強弱變化繪制出相應的實時擴增曲線，進而判定嗜肺軍團菌是否檢出。

嗜肺軍團菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)產(chǎn)品組分：

儲存條件與保質(zhì)期：-20℃儲存，有效期為12個月，避免反復凍融。

靈敏度：最低檢驗限達到100 CFU/Test

所需其他材料和適用儀器：熒光定量PCR儀（具有能夠檢測FAM標記的熒光通道）、高速離心機、移液器、移液槍頭及離心管等。

嗜肺軍團菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)使用指南：

1，樣品前處理

   1) 樣品增菌液模板 DNA 的制備：
         a) 取樣過程參考國標《GB/T 18204.3-2025公共場所衛(wèi)生檢驗方法 第3部分：空氣微生物》，或各實驗室自行建立的方法；
         b) 吸取采樣后的吸收液1 mL到1.5 mL規(guī)格的無菌離心管中，12000r/min離心5 min，完全去除上清；
         c) 加入30 μL裂解液，充分懸浮菌體，輕彈管壁消除氣泡，100℃加熱5-10 min；
         d) 12000 r/min離心2 min，上清即為粗提的DNA，可轉移至0.2 mL無菌離心管中，在-20℃下可長期保存。

   2) 可疑菌落模板 DNA 的制備：挑取可疑菌落，充分懸浮于預先加有30 μL裂解液的無菌離心管中，后按照上述步驟c)、d)操作。

2, 加樣、反應

   1) 按照需求取n個PCR反應管（n=待檢測樣品數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照），從試劑盒中取出預混液，充分融化，渦旋振蕩后短暫離心，向以上每個PCR管中加入20 μL預混液。
   2) 向上述n個反應管中分別按順序加入陰性對照、待測樣品DNA、陽性對照各5 μL，加樣后立刻蓋緊管蓋，短暫離心，立即進行PCR擴增反應。
   3) PCR反應體系為25 μL，設置FAM檢測通道讀取，在反應階段2中60℃時收集熒光信號，具體程序如下：

3, 結果：一般情況下，可通過軟件自動設定的基線、閾值等直接讀取檢測結果。如需調(diào)整，可根據(jù)所使用儀器的自身情況（如噪聲等）以及選取的不同熒光通道進行調(diào)整。

   1) 質(zhì)量控制：陰性對照未出現(xiàn)明顯的S型擴增曲線或Ct值＞39，陽性對照出現(xiàn)S型擴增曲線且其Ct值＜30。若陰陽性對照不同時滿足上述條件，則本次檢測結果無效，應重新檢測或與產(chǎn)品技術支持聯(lián)系。

   2) 結果判讀：（根據(jù)反應所得Ct值判讀，具體見下表：）

• FZ015BF2 嗜肺軍團菌核酸檢測試劑盒 產(chǎn)品使用說明書